ELISA試劑盒斑點(diǎn)印跡雜交基本原理
①ELISA試劑盒先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。
②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。
③用鉛筆在濾膜上標(biāo)好位置,將DNA點(diǎn)樣于膜上,每個樣品一般點(diǎn)5μl(2~10μg DNA)。
④將膜烘干，密封保存?zhèn)溆谩?/p>
ELISA試劑盒與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA(經(jīng)酚/或異硫氰酸胍提取純化)，方法是將RNA溶于5μl DEPC水，加5μl甲醛/SSC緩沖液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛)，使RNA變性，然后取5-8μl點(diǎn)樣于處理好的濾膜上，烘干。
應(yīng)用類似檢測細(xì)菌菌落的方法，ELISA試劑盒可以對細(xì)胞培養(yǎng)物的特異序列進(jìn)行快速檢測，將整個細(xì)胞點(diǎn)到膜上，經(jīng)NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規(guī)方法進(jìn)行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養(yǎng)細(xì)胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細(xì)胞斑點(diǎn)印跡法可以用于篩選大量標(biāo)本，因?yàn)樗辜?xì)胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法還高，又不影響與32P標(biāo)記的探針雜交，但它不適用于非放射性標(biāo)記探針，因?yàn)镈NA純度不夠，會產(chǎn)生高本底。
